Технология получения PRP: этапы центрифугирования, классификация фракций и выбор оборудования

Эффективность PRP — терапии для заживления тканей подтверждается все большим количеством исследований. Лечение плазмой, обогащенной тромбоцитами, используется в ортопедии, дерматологии, стоматологии и челюстно-лицевой хирургии.

В норме концентрация тромбоцитов в плазме крови составляет около 200 тыс. клеток на мл. Терапевтически эффективной концентрацией принято считать от 1 млн. тромбоцитов в мл. плазмы. В среднем это 4-7 кратное увеличение количества клеток в мл.

В настоящее время в зависимости от количества фибрина и лейкоцитов препараты PRP классифицируют на несколько видов:


• Чистая обогащенная тромбоцитами плазма крови (P-PRP — Pure Platelet-Rich Plasma), жидкая форма

• Обогащенная тромбоцитами и лейкоцитами плазма крови (L-PRP —Leucocyte and Platelet-Rich Plasma), жидкая форма

• Чистый обогащенный тромбоцитами фибрин (P-PRF — Pure Platelet-Rich Fibrin)

• Обогащенный лейкоцитами и тромбоцитами фибрин (L-PRF — Leucocyte and Platelet-Rich Fibrin)

Для получения богатой тромбоцитами плазмы рекомендовано проводить двухэтапное центрифугирование.

Первый этап центрифугирования

При первом этапе во избежание гемолиза эритроцитов проводят низкоскоростное мягкое центрифугирование при 270g.

Использование центрифуги c медленным разгоном и торможением, такой как компактная центрифуга iFuge С4000 NXT Neuation Accumax с бакетным ротором, способствует идеальному разделению компонентов крови при максимально деликатном центрифугировании.

Режимы контролируемого медленного разгона и торможения iFUGE C4000 NXT Neuation Accumax позволяют избежать вибрации и максимально сохраняют жизнеспособность клеток крови.

При этих режимах осаждаются сначала эритроциты, потом лейкоциты, тромбоциты же сохраняются в плазме. Щадящие режимы центрифугирования iFUGE C4000 NXT бережно разделяют клетки и предотвращают преждевременную активацию тромбоцитов, а использование бакетного ротора RS06 позволяет достичь идеально-ровной границы между слоями клеток для более чистого отбора обогащенной тромбоцитами фракции.

Второй этап центрифугирования

Второй этап центрифугирования отобранной фракции плазмы, содержащей бедную тромбоцитами плазму и верхнюю часть промежуточного слоя в зависимости от техники отбора позволяет получить либо чистую обогащенную тромбоцитами плазму (P-PRP). При этом основная масса лейкоцитов (лейкоцитарное кольцо «Buffy coat») и эритроциты остаются в первичной пробирке. Либо обогащенную тромбоцитами и лейкоцитами плазму L-PRP.

Содержимое вторичной пробирки центрифугируют при 2300 g в течении 10 минут, отбирают 2/3 супернатанта. Оставшуюся 1/3 ресуспендируют вместе с осадком и получают чистую обогащенную тромбоцитами плазму (P-PRP).

Для получения плазмы, обогащенной лейкоцитами, и тромбоцитами (L-PRP) из первичной пробирки отбирают весь слой лейкоцитов и тромбоцитов, при отборе во вторичную пробирку могут попадать следовые количества эритроцитов. Вторичную пробирку центрифугируют при ускорении до 2300g в течении 10 минут, отбирают 2/3 супернатанта. Оставшуюся 1/3 ресуспендируют вместе с осадком и получают плазму, обогащенную лейкоцитами и тромбоцитами (L-PRP).

При применении L-PRP важно помнить о рисках, связанных с воспалительными реакциями.

Разделение проводят в специализированных вакуумных пробирках с антикоагулянтом цитратом натрия с раствором глюкозы и сукцината натрия. Иногда в качестве антикоагулянта используют натрий гепарин, однако не следует забывать о возможности гепарин-индуцированной тромбоцитопении.

Широкое применение в стоматологической практике получила вязкая форма тромбоцитарной аутологичной плазмы (Plasmolifting viscosae). Эту форму используют для депонирования активных компонентов в определенной зоне реконструкции десны. Вязкую фракцию получают путем нагревания плазмы до 42℃, при этом нити фибрина необратимо денатурируют. Термостатирование можно провести в компактном инкубаторе IN30 производства Memmert (Германия).

Высокочувствительный инкубатор IN30 с системой нагрева и контроля температуры обеспечит идеальные условия для поддержания нужной температуры. Образовавшийся при нагревании сгусток, задерживает диффузию активных компонентов и сохраняет их максимально долго в зоне введения.

Для запуска процессов регенерации используют тромбоцитарную аутологичную плазму в нативной форме, а для реконструкции недостающего объема мягких тканей используют плазмогель и плазмомембрану.

Обогащенная тромбоцитами плазма также показана при травмах опорно-двигательного аппарата, повреждении мягких тканей, травмах мышц, разрыве связок, повреждении хрящевой ткани, остеоартритах.

Заключение

Аутологичная плазма пациента на 100% биосовместима, не токсична и безопасна. Собственная плазма пациента не несет рисков иммуногенных реакций и инфицирования гемоконтактными заболеваниями.

Обогащенная тромбоцитами плазма содержит различные биологически активные вещества в том числе факторы роста и цитокины.

Тромбоцитарные факторы роста (PDGF), стимулируют митотическую активность клеток, а также участвуя в хемотаксисе, способствуют миграции фибробластов и миоцитов в зоны повреждения тканей.

Трансформирующий фактор роста (TGF) контролирует деление и клеточную дифференцировку также способствует пролиферации клеток, улучшает микроциркуляцию в пораженных тканях.

Инсулиноподобный фактор роста (IGF) участвует в синтезе коллагена и стимулирует дифференцировку стволовых клеток.

Эти и другие активные компоненты способствуют росту сосудов, стимулируя регенерацию тканей.

Таким образом, PRP терапия способствует уменьшению воспаления и усиливает регенерацию тканей. Под действием активных компонентов восстанавливаются обменные процессы и происходит заживление.