Технология получения PRP: этапы центрифугирования, классификация фракций и выбор оборудования

Эффективность PRP — терапии для заживления тканей подтверждается все большим количеством исследований. Лечение плазмой, обогащенной тромбоцитами, используется в ортопедии, дерматологии, стоматологии и челюстно-лицевой хирургии.

В норме концентрация тромбоцитов в плазме крови составляет около 200 тыс. клеток на мл. Терапевтически эффективной концентрацией принято считать от 1 млн. тромбоцитов в мл. плазмы. В среднем это 4-7 кратное увеличение количества клеток в мл.

В настоящее время в зависимости от количества фибрина и лейкоцитов препараты PRP классифицируют на несколько видов:

• Чистая обогащенная тромбоцитами плазма крови (P-PRP — Pure Platelet-Rich Plasma), жидкая форма
• Обогащенная тромбоцитами и лейкоцитами плазма крови (L-PRP —Leucocyte and Platelet-Rich Plasma), жидкая форма
• Чистый обогащенный тромбоцитами фибрин (P-PRF — Pure Platelet-Rich Fibrin)
• Обогащенный лейкоцитами и тромбоцитами фибрин (L-PRF — Leucocyte and Platelet-Rich Fibrin)

Рис. 1 Получение обогащенной тромбоцитами плазмы

Для получения богатой тромбоцитами плазмы рекомендовано проводить двухэтапное центрифугирование.

Первый этап центрифугирования

При первом этапе во избежание гемолиза эритроцитов проводят низкоскоростное мягкое центрифугирование при 270g.

Рис. 2. Центрифуга iFuge С4000 NXT Neuation Accumax

Использование центрифуги c медленным разгоном и торможением, такой как компактная центрифуга iFuge С4000 NXT Neuation Accumax с бакетным ротором, способствует идеальному разделению компонентов крови при максимально деликатном центрифугировании.

Режимы контролируемого медленного разгона и торможения iFUGE C4000 NXT Neuation Accumax позволяют избежать вибрации и максимально сохраняют жизнеспособность клеток крови.

При этих режимах осаждаются сначала эритроциты, потом лейкоциты, тромбоциты же сохраняются в плазме. Щадящие режимы центрифугирования iFUGE C4000 NXT бережно разделяют клетки и предотвращают преждевременную активацию тромбоцитов, а использование бакетного ротора RS06 позволяет достичь идеально-ровной границы между слоями клеток для более чистого отбора обогащенной тромбоцитами фракции.

Рис. 3. Этапы центрифугирования

Первый этап:

Мягкое центрифугирование цельной крови с разделением на эритроциты, лейкоцитарное кольцо и плазму с тромбоцитами.

Второй этап:

· Для получения P-PRP (чистая обогащенная тромбоцитами плазма) отбор плазмы с тромбоцитами с захватом верхней части лейкоцитарного кольца дальнейшее центрифугирование

· Для получения L-PRP (обогащенная тромбоцитами и лейкоцитами плазма) отбор плазмы с тромбоцитами и полный захват лейкоцитарного кольца (могут попасть следовые количества эритроцитов), дальнейшее центрифугирование

Второй этап центрифугирования

Второй этап центрифугирования отобранной фракции плазмы, содержащей бедную тромбоцитами плазму и верхнюю часть промежуточного слоя в зависимости от техники отбора позволяет получить либо чистую обогащенную тромбоцитами плазму (P-PRP). При этом основная масса лейкоцитов (лейкоцитарное кольцо «Buffy coat») и эритроциты остаются в первичной пробирке. Либо обогащенную тромбоцитами и лейкоцитами плазму L-PRP.

Содержимое вторичной пробирки центрифугируют при 2300 g в течении 10 минут, отбирают 2/3 супернатанта. Оставшуюся 1/3 ресуспендируют вместе с осадком и получают чистую обогащенную тромбоцитами плазму (P-PRP).

Для получения плазмы, обогащенной лейкоцитами, и тромбоцитами (L-PRP) из первичной пробирки отбирают весь слой лейкоцитов и тромбоцитов, при отборе во вторичную пробирку могут попадать следовые количества эритроцитов. Вторичную пробирку центрифугируют при ускорении до 2300g в течении 10 минут, отбирают 2/3 супернатанта. Оставшуюся 1/3 ресуспендируют вместе с осадком и получают плазму, обогащенную лейкоцитами и тромбоцитами (L-PRP).

Рис. 4. Процентный состав крови

При применении L-PRP важно помнить о рисках, связанных с воспалительными реакциями.

Разделение проводят в специализированных вакуумных пробирках с антикоагулянтом цитратом натрия с раствором глюкозы и сукцината натрия. Иногда в качестве антикоагулянта используют натрий гепарин, однако не следует забывать о возможности гепарин-индуцированной тромбоцитопении.

Рис. 5. Инкубатор лабораторный с естественной циркуляцией малого объема IN 30 Memmert (Германия)

Широкое применение в стоматологической практике получила вязкая форма тромбоцитарной аутологичной плазмы (Plasmolifting viscosae). Эту форму используют для депонирования активных компонентов в определенной зоне реконструкции десны. Вязкую фракцию получают путем нагревания плазмы до 42℃, при этом нити фибрина необратимо денатурируют. Термостатирование можно провести в компактном инкубаторе IN30 производства Memmert (Германия).

Высокочувствительный инкубатор IN30 с системой нагрева и контроля температуры обеспечит идеальные условия для поддержания нужной температуры. Образовавшийся при нагревании сгусток, задерживает диффузию активных компонентов и сохраняет их максимально долго в зоне введения.

Для запуска процессов регенерации используют тромбоцитарную аутологичную плазму в нативной форме, а для реконструкции недостающего объема мягких тканей используют плазмогель и плазмомембрану.

Обогащенная тромбоцитами плазма также показана при травмах опорно-двигательного аппарата, повреждении мягких тканей, травмах мышц, разрыве связок, повреждении хрящевой ткани, остеоартритах.

Заключение

Аутологичная плазма пациента на 100% биосовместима, не токсична и безопасна. Собственная плазма пациента не несет рисков иммуногенных реакций и инфицирования гемоконтактными заболеваниями.

Обогащенная тромбоцитами плазма содержит различные биологически активные вещества в том числе факторы роста и цитокины.

Тромбоцитарные факторы роста (PDGF), стимулируют митотическую активность клеток, а также участвуя в хемотаксисе, способствуют миграции фибробластов и миоцитов в зоны повреждения тканей.

Трансформирующий фактор роста (TGF) контролирует деление и клеточную дифференцировку также способствует пролиферации клеток, улучшает микроциркуляцию в пораженных тканях.

Инсулиноподобный фактор роста (IGF) участвует в синтезе коллагена и стимулирует дифференцировку стволовых клеток.

Эти и другие активные компоненты способствуют росту сосудов, стимулируя регенерацию тканей.

Таким образом, PRP терапия способствует уменьшению воспаления и усиливает регенерацию тканей. Под действием активных компонентов восстанавливаются обменные процессы и происходит заживление.